Tenosinovitis por Mycobacterium bovis / Tenosynovitis by Mycobacterium bovis / Tenossinovite por Mycobacterium bovis

Resumen Tenosinovitis es la inflamación o infección de un tendón y su vaina sinovial. Una de las causas puede ser bacteriana. Los gérmenes comunes son los más frecuentes, pero deben investigarse también las micobacterias. En la Argentina, la tuberculosis es un problema de salud pública. Mycobacterium bovis ocasiona zoonosis que afectan animales y humanos. La infección en el hombre se da por inhalación de aerosoles de ganado enfermo, por vía digestiva o cutánea. Las manifestaciones extrapulmonares pueden ser digestivas, ganglionares, cutáneas u osteoarticulares. La tenosinovitis tuberculosa de muñeca es infrecuente y, generalmente, es diagnosticada como tenosinovitis reumática o inespecífica. Se presenta el caso de una mujer de 48 años, residente de zona rural, que presentaba hipertrofia y edema en dedos de la mano izquierda. Se le realizó cirugía del túnel carpiano y se observaron cuerpos como granos de arroz. Del tejido sinovial se aisló M. bovis. Comenzó tratamiento tuberculostático más claritromicina. Evolucionó favorablemente.

Abstract Tenosynovitis is an inflammation or infection of a tendon and its synovial sheath. One cause of this illness may be bacterial, being common organisms more frequent, but mycobacteria should be also investigated. In Argentina, tuberculosis is a public health problem. Mycobacterium bovis causes zoonoses that affect animals and humans. Infection in man occurs by inhalation of aerosols from sick cattle, by digestive or cutaneous routes. Extrapulmonary manifestations can be digestive, nodal, cutaneous or osteoarticular. Tuberculous wrist tenosynovitis is uncommon, usually diagnosed as rheumatic or nonspecific tenosynovitis. The case of a 48-year-old woman, a resident of rural areas, presenting hypertrophy, and edema in the fingers of the left hand was introduced. Carpal tunnel surgery was performed, while rice grain bodies were noticed. Synovial tissue material was taken for mycobacterial culture, where M. bovis was isolated. She began tuberculostatic treatment plus clarithromycin. She evolved favourably.

Resumo A tenossinovite é a inflamação ou infecção de um tendão e sua bainha sinovial. A causa pode ser bacteriana, sendo os germes comuns os mais frequentes, mas as micobactérias devem ser investigadas. Na Argentina, a tuberculose é um problema de saúde pública. Mycobacterium bovis causa zoonose que afeta animais e humanos. A infecção no homem ocorre por inalação de aerossóis de gado doente, por via digestiva ou cutânea. As manifestações extrapulmonares podem ser digestivas, ganglionares, cutâneas, osteoarticulares. A tenossinovite tuberculosa do pulso é pouco frequente, geralmente diagnosticada como tenossinovite reumática ou inespecífica. Apresenta-se o caso de uma mulher de 48 anos, moradora de zona rural, com hipertrofia e edema nos dedos da mão esquerda. Foi realizada cirurgia do túnel do carpo, observando-se corpos como grãos de arroz. Do tecido sinovial foi isolado M. bovis. Iniciou-se tratamento tuberculostático mais claritromicina. Evoluiu favoravelmente.

Spatial and temporal analyses of culls due to bovine tuberculosis in slaughterhouses of Minas Gerais state, Brazil, 2008 to 2012 / Análise espacial e temporal das condenações por tuberculose bovina em frigoríficos do estado de Minas Gerais, Brasil, 2008 a 2012

The application of spatial and temporal analysis in epidemiology aims to understand the causes and consequences of spatial and temporal heterogeneity in studies of infectious diseases. Bovine tuberculosis (bTB) is a chronic and progressive infectious disease caused by Mycobacterium bovis and is an important zoonosis worldwide. The aim of this study was to conduct spatial and temporal analyses of a secondary database of bTB-positive cases registered by the Federal Inspection Service in two slaughterhouses from the West of Minas mesoregion of Minas Gerais state, Brazil, from 2008 to 2012 and to suggest its use in epidemiological surveillance. The culled cattle with bTB macroscopic lesions during post mortem inspection were considered positive in this study. The data used were the positive cases registered on the "Sistema de Informações Gerenciais do Serviço de Inspeção Federal" (SIG/SIF - Management Information System of the Federal Inspection Service) of the "Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento" (MAPA - Ministry of Agriculture, Livestock and Supplies), the number of animals slaughtered monthly and their municipalities of origin, per slaughterhouse. The prevalence (%) of cases per cattle slaughtered was calculated, and the relationship between these cases of bTB and cases of human tuberculosis (hTB) and the GDP per capita of the mesoregions comprising the municipalities surveyed was evaluated. The prevalence was 1,030 cases of bTB (0.28%). The lowest case numbers and prevalence rates were obtained in 2010, while the highest rates were observed in 2011. Slaughterhouse 1 showed stationarity, while Slaughterhouse 2 showed an increasing annual trend for data since October 2009. A statistical correlation between the numbers of cases of bovine and human TB (p=0.006, r=0.148) was observed. The prevalence for Slaughterhouses 1 and 2 were not correlated (p>0.05). The municipalities of origin demonstrated randomness in their spatial distribution. SIG/SIF-MAPA may be used for the analysis of spatial and temporal distribution to contribute to the monitoring of animal health services with information on the prevalence of culling for bTB in the West of Minas, South/Southwest of Minas, Campo das Vertentes and Zona da Mata mesoregions of Minas Gerais, Brazil.(AU)

A aplicação de análises espacial e temporal em epidemiologia visa compreender as causas e consequências da heterogeneidade espacial e temporal nos estudos de doenças infecciosas. A tuberculose bovina (TBb) é uma doença infecciosa crônica e progressiva causada pelo Mycobacterium bovis e uma importante zoonose em todo o mundo. O objetivo deste estudo foi realizar análises espaciais e temporais em um banco de dados secundário de casos positivos de TBb registrados pelo Serviço de Inspeção Federal em dois frigoríficos da mesorregião Oeste de Minas, estado de Minas Gerais, Brasil, de 2008 a 2012 e sugerir sua utilização na vigilância epidemiológica. Os bovinos abatidos com lesões macroscópicas de TBb durante a inspeção post mortem foram considerados positivos neste estudo. Os dados utilizados foram os casos positivos cadastrados no Sistema de Informações Gerenciais do Serviço de Inspeção Federal do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (SIGSIF/MAPA), o número de animais abatidos mensalmente e seus municípios de origem, por frigorífico. Foi calculada a prevalência (%) de casos por bovinos abatidos e avaliada a relação entre esses casos de TBb e os casos de tuberculose humana (TBh) e o PIB per capita das mesorregiões que compõem os municípios pesquisados. A prevalência foi de 1.030 casos de TBb (0,28%). Os menores números de casos e prevalências foram obtidos em 2010, enquanto as maiores prevalências foram observadas em 2011. O Frigorífico 1 apresentou estacionariedade, enquanto o Frigorífico 2 apresentou tendência anual crescente para os dados desde outubro de 2009. Correlação estatística entre o número de casos de TBb e TBh (p=0,006, r=0,148) foi observada. As prevalências nos Frigoríficos 1 e 2 não se correlacionaram (p>0,05). Os municípios de origem demonstraram aleatoriedade em sua distribuição espacial. O SIGSIF/MAPA pode ser utilizado para a análise da distribuição espacial e temporal a fim de contribuir com o monitoramento dos serviços de saúde animal com informações sobre a prevalência de condenações por TBb nas mesorregiões Oeste de Minas, Sul/Sudoeste de Minas, Campo das Vertentes e Zona da Mata de Minas Gerais, Brasil.(AU)

Spatial and temporal analyses of culls due to bovine tuberculosis in slaughterhouses of Minas Gerais state, Brazil, 2008 to 2012

ABSTRACT: The application of spatial and temporal analysis in epidemiology aims to understand the causes and consequences of spatial and temporal heterogeneity in studies of infectious diseases. Bovine tuberculosis (bTB) is a chronic and progressive infectious disease caused by Mycobacterium bovis and is an important zoonosis worldwide. The aim of this study was to conduct spatial and temporal analyses of a secondary database of bTB-positive cases registered by the Federal Inspection Service in two slaughterhouses from the West of Minas mesoregion of Minas Gerais state, Brazil, from 2008 to 2012 and to suggest its use in epidemiological surveillance. The culled cattle with bTB macroscopic lesions during post mortem inspection were considered positive in this study. The data used were the positive cases registered on the Sistema de Informações Gerenciais do Serviço de Inspeção Federal (SIG/SIF - Management Information System of the Federal Inspection Service) of the Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA - Ministry of Agriculture, Livestock and Supplies), the number of animals slaughtered monthly and their municipalities of origin, per slaughterhouse. The prevalence (%) of cases per cattle slaughtered was calculated, and the relationship between these cases of bTB and cases of human tuberculosis (hTB) and the GDP per capita of the mesoregions comprising the municipalities surveyed was evaluated. The prevalence was 1,030 cases of bTB (0.28%). The lowest case numbers and prevalence rates were obtained in 2010, while the highest rates were observed in 2011. Slaughterhouse 1 showed stationarity, while Slaughterhouse 2 showed an increasing annual trend for data since October 2009. A statistical correlation between the numbers of cases of bovine and human TB (p=0.006, r=0.148) was observed. The prevalence for Slaughterhouses 1 and 2 were not correlated (p>0.05). The municipalities of origin demonstrated randomness in their spatial distribution. SIG/SIF-MAPA may be used for the analysis of spatial and temporal distribution to contribute to the monitoring of animal health services with information on the prevalence of culling for bTB in the West of Minas, South/Southwest of Minas, Campo das Vertentes and Zona da Mata mesoregions of Minas Gerais, Brazil.

RESUMO: A aplicação de análises espacial e temporal em epidemiologia visa compreender as causas e consequências da heterogeneidade espacial e temporal nos estudos de doenças infecciosas. A tuberculose bovina (TBb) é uma doença infecciosa crônica e progressiva causada pelo Mycobacterium bovis e uma importante zoonose em todo o mundo. O objetivo deste estudo foi realizar análises espaciais e temporais em um banco de dados secundário de casos positivos de TBb registrados pelo Serviço de Inspeção Federal em dois frigoríficos da mesorregião Oeste de Minas, estado de Minas Gerais, Brasil, de 2008 a 2012 e sugerir sua utilização na vigilância epidemiológica. Os bovinos abatidos com lesões macroscópicas de TBb durante a inspeção post mortem foram considerados positivos neste estudo. Os dados utilizados foram os casos positivos cadastrados no Sistema de Informações Gerenciais do Serviço de Inspeção Federal do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (SIGSIF/MAPA), o número de animais abatidos mensalmente e seus municípios de origem, por frigorífico. Foi calculada a prevalência (%) de casos por bovinos abatidos e avaliada a relação entre esses casos de TBb e os casos de tuberculose humana (TBh) e o PIB per capita das mesorregiões que compõem os municípios pesquisados. A prevalência foi de 1.030 casos de TBb (0,28%). Os menores números de casos e prevalências foram obtidos em 2010, enquanto as maiores prevalências foram observadas em 2011. O Frigorífico 1 apresentou estacionariedade, enquanto o Frigorífico 2 apresentou tendência anual crescente para os dados desde outubro de 2009. Correlação estatística entre o número de casos de TBb e TBh (p=0,006, r=0,148) foi observada. As prevalências nos Frigoríficos 1 e 2 não se correlacionaram (p>0,05). Os municípios de origem demonstraram aleatoriedade em sua distribuição espacial. O SIGSIF/MAPA pode ser utilizado para a análise da distribuição espacial e temporal a fim de contribuir com o monitoramento dos serviços de saúde animal com informações sobre a prevalência de condenações por TBb nas mesorregiões Oeste de Minas, Sul/Sudoeste de Minas, Campo das Vertentes e Zona da Mata de Minas Gerais, Brasil.

Bovine tuberculosis in safari park in Brazil

ABSTRACT: Bovine tuberculosis (bTB) is an infectious disease caused by Mycobacterium bovis, affecting domestic animals, wild animals and humans. In captivity, for wild animals, bTB represents a risk to animal keepers and zoo visitors, in addition to the possibility of spreading the infection to domestic animals or through the trade of infected wild animals. Sambar (Cervus unicolor), red deer (Cervus elaphus) and fallow deer (Dama dama) from a safari park in the State of Rio Grande do Sul, Brazil, showed a clinical condition of dyspnea and weight loss. Some animals died and showed lesions suggestive of tuberculosis (LST), which were confirmed by histopathology. After the interdiction of the safari park by the state veterinary authorities, 281 deer were euthanized with the authorization of the Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renováveis (IBAMA). Retropharyngeal and submandibular lymph nodes and viscera were collected from 21 animals, which were grown in Stonebrink medium for up to 90 days. After DNA extraction from the bacterial colonies, PCR was performed for targets flanking the region of differentiation 4 (RD4). Of the 21 samples, 14 (66.7%) presented LST with a granulomatous appearance, a whitish coloration, and caseous or calcified consistency, and seven samples (33.3%), showed no lesions. In the culture of 14 samples with LST, 13 (92.8%) presented bacterial growth compatible with M. bovis. In the cultivation of the seven samples without LST, four (57.1%) presented colonies compatible with M. bovis. PCR and DNA sequencing of the PCR amplicons detected as positive all the 17 (100%) bacteriological cultures suggestive of M. bovis, thus confirming the outbreak of bTB in deer. Decisions about positive tested and suspicious animals should be taken based on the evaluation of the risk of transmission to the rest of the zoological animals, animal welfare, conservation considerations and, the zoonotic potential of this pathogen.

RESUMO: A tuberculose bovina (bTB) é uma doença infecciosa causada por Mycobacterium bovis, afetando animais domésticos, animais selvagens e humanos. Para animais selvagens em cativeiro, a bTB representa um risco para os tratadores de animais e visitantes do zoológico, além da possibilidade de espalhar a infecção para animais domésticos ou por meio do comércio de animais silvestres infectados. Cervídeos sambar (Cervus unicolor), veado-vermelho (Cervus elaphus) e gamo (Dama dama) de um parque safári no Estado do Rio Grande do Sul, Brasil, mostraram uma condição clínica de dispneia e perda de peso. Alguns animais morreram e apresentaram lesões sugestivas de tuberculose (LST), as quais foram confirmadas por histopatologia. Após a interdição do parque safári pelas autoridades veterinárias estaduais, 281 veados sofreram eutanásia com a autorização do Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renováveis (IBAMA). Os linfonodos retrofaríngeos e submandibulares e vísceras foram coletados de 21 animais, que foram cultivados em meio Stonebrink por até 90 dias. Após extração de DNA das colônias bacterianas, foi realizada PCR para alvos que flanqueavam a região de diferenciação 4 (RD4). Das 21 amostras, 14 (66,7%) apresentaram LST com aspecto granulomatoso, coloração esbranquiçada e consistência caseosa ou calcificada, e sete amostras (33,3%) não apresentaram lesões. Na cultura de 14 amostras com LST, 13 (92,8%) apresentaram crescimento bacteriano compatível com M. bovis. No cultivo das sete amostras sem LST, quatro (57,1%) apresentaram colônias compatíveis com M. bovis. A PCR e o sequenciamento de DNA dos fragmentos de PCR detectaram como positivo todas as 17 (100%) culturas bacteriológicas sugestivas de M. bovis, confirmando assim o surto de bTB em cervídeos. As decisões sobre animais positivos testados e suspeitos devem ser tomadas com base na avaliação do risco de transmissão para o restante dos animais zoológicos, bem-estar animal, considerações de conservação e no potencial zoonótico desse patógeno.

Bovine tuberculosis in safari park in Brazil / Tuberculose bovina em parque safári no Brasil

Bovine tuberculosis (bTB) is an infectious disease caused by Mycobacterium bovis, affecting domestic animals, wild animals and humans. In captivity, for wild animals, bTB represents a risk to animal keepers and zoo visitors, in addition to the possibility of spreading the infection to domestic animals or through the trade of infected wild animals. Sambar (Cervus unicolor), red deer (Cervus elaphus) and fallow deer (Dama dama) from a safari park in the State of Rio Grande do Sul, Brazil, showed a clinical condition of dyspnea and weight loss. Some animals died and showed lesions suggestive of tuberculosis (LST), which were confirmed by histopathology. After the interdiction of the safari park by the state veterinary authorities, 281 deer were euthanized with the authorization of the "Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renováveis" (IBAMA). Retropharyngeal and submandibular lymph nodes and viscera were collected from 21 animals, which were grown in Stonebrink medium for up to 90 days. After DNA extraction from the bacterial colonies, PCR was performed for targets flanking the region of differentiation 4 (RD4). Of the 21 samples, 14 (66.7%) presented LST with a granulomatous appearance, a whitish coloration, and caseous or calcified consistency, and seven samples (33.3%), showed no lesions. In the culture of 14 samples with LST, 13 (92.8%) presented bacterial growth compatible with M. bovis. In the cultivation of the seven samples without LST, four (57.1%) presented colonies compatible with M. bovis. PCR and DNA sequencing of the PCR amplicons detected as positive all the 17 (100%) bacteriological cultures suggestive of M. bovis, thus confirming the outbreak of bTB in deer. Decisions about positive tested and suspicious animals should be taken based on the evaluation of the risk of transmission to the rest of the zoological animals, animal welfare, conservation considerations and, the zoonotic potential of this pathogen.(AU)

A tuberculose bovina (bTB) é uma doença infecciosa causada por Mycobacterium bovis, afetando animais domésticos, animais selvagens e humanos. Para animais selvagens em cativeiro, a bTB representa um risco para os tratadores de animais e visitantes do zoológico, além da possibilidade de espalhar a infecção para animais domésticos ou por meio do comércio de animais silvestres infectados. Cervídeos sambar (Cervus unicolor), veado-vermelho (Cervus elaphus) e gamo (Dama dama) de um parque safári no Estado do Rio Grande do Sul, Brasil, mostraram uma condição clínica de dispneia e perda de peso. Alguns animais morreram e apresentaram lesões sugestivas de tuberculose (LST), as quais foram confirmadas por histopatologia. Após a interdição do parque safári pelas autoridades veterinárias estaduais, 281 veados sofreram eutanásia com a autorização do Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renováveis (IBAMA). Os linfonodos retrofaríngeos e submandibulares e vísceras foram coletados de 21 animais, que foram cultivados em meio Stonebrink por até 90 dias. Após extração de DNA das colônias bacterianas, foi realizada PCR para alvos que flanqueavam a região de diferenciação 4 (RD4). Das 21 amostras, 14 (66,7%) apresentaram LST com aspecto granulomatoso, coloração esbranquiçada e consistência caseosa ou calcificada, e sete amostras (33,3%) não apresentaram lesões. Na cultura de 14 amostras com LST, 13 (92,8%) apresentaram crescimento bacteriano compatível com M. bovis. No cultivo das sete amostras sem LST, quatro (57,1%) apresentaram colônias compatíveis com M. bovis. A PCR e o sequenciamento de DNA dos fragmentos de PCR detectaram como positivo todas as 17 (100%) culturas bacteriológicas sugestivas de M. bovis, confirmando assim o surto de bTB em cervídeos. As decisões sobre animais positivos testados e suspeitos devem ser tomadas com base na avaliação do risco de transmissão para o restante dos animais zoológicos, bem-estar animal, considerações de conservação e no potencial zoonótico desse patógeno.(AU)

Isolation and genotyping of Mycobacterium bovis in suggestive lesions of tuberculosis in cattle slaughtered in the state of Ceará, Brazil / Isolamento e tipificação genética de Mycobacterium bovis em lesões sugestivas de tuberculose em bovinos abatidos no estado do Ceará

Bovine tuberculosis (BTB) is a zoonosis caused by the bacterium Mycobacterium bovis, which induces the development of nodular and granulomatous lesions in various animal tissues. The recognition of these suggestive gross lesions during postmortem sanitary inspection in slaughterhouses provides a presumptive diagnosis, which requires the use of complementary tests to confirm the disease. This study aimed to verify the occurrence of BTB in cattle slaughtered in slaughterhouses in the state of Ceará, Brazil, using bacteriological and molecular methods. To this end, suggestive lesions were analyzed on carcasses condemned by the "Serviço de Inspeção Estadual" (SIE). The samples were submitted to microbiological analysis using culture media and specific staining followed by spoligotyping molecular technique for identification and genotyping of the mycobacteria. Occurrence of lesions suggestive of BTB was verified in bovine carcasses (0.071%) from different municipalities of the state. These lesions were located mainly in the lung (95.12%), lymph nodes (58.53%), and liver (36.58%). Microbiological culture showed bacterial isolation (17.94%), with the growth of colonies showing morphological and tannic characteristics belonging to genus Mycobacterium spp. Genetic polymorphism analysis identified M. bovis in all isolates, which were discriminated into six spoligotypes (SB0121, SB0295, SB1064, SB0120, SB0870, and SB0852). These profiles have been described in Brazil and several areas of the world, except for profiles SB1064 and SB0852, which were described in the country for the first time. The results show that the association of the diagnostic methods used was the basis for the first study on identification of mycobacteria found in the state, which may provide a database for the epidemiological study of BTB in the state of Ceará.(AU)

A tuberculose bovina (TB) é uma zoonose causada pelo Mycobacterium bovis, o qual induz ao desenvolvimento de lesões nodulares e granulomatosas em vários tecidos do animal. O reconhecimento dessas lesões macroscópicas sugestivas durante a inspeção sanitária post mortem em matadouros fornece um diagnóstico presuntivo, sendo necessário a utilização de testes complementares para confirmação da doença. O objetivo deste trabalho foi verificar a ocorrência da TB em animais abatidos em matadouros-frigoríficos no estado do Ceará através da utilização de métodos bacteriológicos e moleculares. Para tanto, foram analisadas lesões sugestivas de TB em carcaças condenadas pelo Serviço de Inspeção Estadual (SIE). As amostras foram submetidas à análise microbiológica, utilizando meios de cultivo e de coloração específicos, seguida pela técnica molecular spoligotyping para identificação e tipificação genética da micobactéria. Verificou-se a ocorrência de lesões sugestivas de TB em carcaças bovinas (0,071%) oriundas de diferentes municípios do estado do Ceará. Essas lesões estavam localizadas principalmente no pulmão (95,12%), linfonodos (58,53%) e fígado (36,58%). O cultivo microbiológico obteve isolamento bacteriano (17,94%), com o crescimento de colônias apresentando características morfológicas e tintoriais pertencentes ao gênero Mycobacterium spp. A análise do polimorfismo genético identificou a presença de M. bovis em todos os isolados, que foram discriminados em seis espoligotipos (SB0121, SB0295, SB1064, SB0120, SB0870 e SB0852), descritos no Brasil e em diversas áreas do mundo, exceto os perfis SB1064 e SB0852 que foram descritos pela primeira vez no país. Os resultados obtidos demonstram que a associação dos métodos diagnósticos utilizados foram a base do primeiro estudo de identificação das micobactérias encontradas no estado do Ceará, o que pode contribuir para a criação de um banco de dados para o estudo epidemiológico da TB no estado.(AU)

Epidemiological analysis of bovine tuberculosis in the southern region of Rio Grande do Sul from 2000 to 2015 / Análise epidemiológica da tuberculose bovina na região sul do Rio Grande do Sul no período de 2000 a 2015

Bovine tuberculosis (BTB) is an infectious and zoonotic disease with socioeconomic importance, responsible for economic losses in livestock due to the decrease in animal productivity, mortality, bovine carcass condemnation and restriction on exportations. The objective of the present study was to evaluate the epidemiological aspects of this disease through a descriptive analysis and time series of cases of bovine tuberculosis diagnosed at the Laboratório Regional de Diagnóstico (LRD) of the Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade Federal de Pelotas (UFPel) from 2000 to 2015. A survey was carried out in the LRD database of cases diagnosed as tuberculosis in cattle during this period. The incidence rate of BTB ([cases/population] x 100000) was calculated. Qualitative variables (sex, age, race, origin, type of material and presumptive diagnosis) were analyzed in a descriptive way, aiming to establish the profile of affected animals, characterize the municipalities in which the disease is originated and also fix the main referral organs for diagnosis. The time series analysis was performed using the Gretl statistical software 1.9.12 (GNU Regression, Econometric and Time-series Library). To verify the existence of the stationary distribution, the test of Dickey-Fuller was used, considering a value of p<0.05. During this period, 331 cases of BTB were diagnosed in the LRD. The present study identified that the predominant profile of the bovines affected by tuberculosis was female bovine aged more than two years old and crossbreed; the main organ sent for histopathological examination was lymph nodes. The microregion of Pelotas presented the highest incidence of the disease. There was also a tendency of a decrease in the incidence rate of this disease over the years, absence of seasonal influence in the occurrence of the disease and no cases of epidemics occurred from 2002 to 2015 in the area covered by the LRD-UFPel.(AU)

Tuberculose bovina é uma enfermidade infectocontagiosa e zoonótica, de importância socioeconômica, responsável por prejuízos econômicos na pecuária em decorrência da diminuição na produtividade animal, mortalidades, condenações de carcaças e restrições nas exportações. O objetivo do presente estudo foi avaliar os aspectos epidemiológicos, por meio de uma análise descritiva e de séries temporais, dos casos de tuberculose bovina diagnosticados no Laboratório Regional de Diagnóstico da Faculdade de Veterinária, Universidade Federal de Pelotas (LRD-UFPel), no período de 2000 a 2015. Foi realizado um levantamento no banco de dados do LRD dos casos diagnosticados como tuberculose em bovinos, entre os anos de 2000 e 2015. Foi calculada a taxa de incidência da tuberculose bovina ([casos/população] x 100000). As variáveis qualitativas (sexo, idade, raça, procedência, tipo de material e diagnóstico presuntivo) foram analisadas de forma descritiva, tendo como finalidade estabelecer o perfil dos animais acometidos, caracterizar os municípios de origem, e estabelecer os principais órgãos remetidos para diagnóstico. A análise de série temporal foi feita através do software estatístico Gretl 1.9.12 (GNU Regression, Econometricand Time-series Library) e para verificar a existência da estacionariedade utilizou-se o teste de Dickey-Fuller aumentado, considerando um valor de p<0,05. Durante este período foram diagnosticados 331 casos de tuberculose bovina no LRD. O presente estudo permitiu concluir que o perfil predominante dos bovinos acometidos por tuberculose foi de fêmeas, com mais de dois anos de idade e mestiças; o principal órgão encaminhado para exame histopatológico foram linfonodos e a microrregião de Pelotas apresentou a maior incidência da doença. Foi constatada, ainda, uma tendência de queda na taxa de incidência da doença ao longo dos anos analisados, ausência de influência sazonal na ocorrência da enfermidade e, não foram registrados casos de epidemias nos anos de 2002 a 2015, na área de abrangência do LRD-UFPel.(AU)

Tuberculose bovina em frigoríficos sob fiscalização estadual no Estado do Rio Grande do Sul nos anos de 2015 a 2017 / Bovine tuberculosis in slaughterhouse under state sanitary inspection in Rio Grande do Sul from 2015 to 2017

A vigilância em matadouros frigoríficos através da inspeção post mortem fornece um mecanismo importante para a detecção de infecções por tuberculose bovina (Mckinley et al 2018). As taxas de detecção de tuberculose bovina em matadouros frigoríficos dependem de fatores como eficácia da inspeção de produtos de origem animal bem como perfil de risco e susceptibilidade da população bovina abatida. Este trabalho teve por objetivo demonstrar a taxa de condenações por lesões sugestivas de Tuberculose bovina em estabelecimentos frigoríficos sob fiscalização Estadual no estado do Rio Grande do Sul entre janeiro de 2015 a dezembro de 2017. Nestes estabelecimentos foram abatidos em 2015 um total de 1.020.554 (100%) animais dos quais 3.622 (0,35%) condenados. Em 2016, 1.002.496 (100%) bovinos foram abatidos, e 5.587 (0,55%) foram condenados. Já em 2017 estes dados totalizaram 1.055.585 (100%) animais abatidos e 6.466 (0,61%) condenados. Os resultados demonstram um aumento gradativo da identificação de lesões sugestivas de tuberculose em matadouros frigoríficos no estado do RS nos anos estudados.

Prevalence of bovine tuberculosis in the Aksu Region of Xinjiang, China, between 1985 and 2016 / Prevalência de tuberculose bovina na região Aksu de Xinjiang, China, entre 1985 e 2016

Prevalence of bovine tuberculosis infection in cattle in Aksu Prefecture determined by intradermal tuberculin skin test (TST), between 1985 and 2016. Cattle were analyzed according to region, feeding pattern, herds and age. A total of 890,009 cattle were tested, with overall bovine tuberculosis prevalence of 0.13% (1172/890009). Statistically significant difference was found in feeding pattern and herds. Prevalence in cows (0.19%, 615/327022) was higher than that in beeves (P< 0.01, OR= 1.903, 95% CI = 1.696 to 2.134). Significant difference (P< 0.01; OR= 2.238, 95%; CI= 1.937 to 2.585) was evident for rates for bovine tuberculosis in the peasant household (0.12%, 942/802343) and farm groups (0.26%, 230/87666). The overall prevalence of bTB was decreased in the Aksu Prefecture, especially the positive rate was under 0.1% in 2010s. We concluded that the control measures forbovine tuberculosis in the Aksu region cattle herds are effective.(AU)

Prevalência de infecção por tuberculose bovina em gado na prefeitura de Aksu determinada por teste cutâneo tuberculínico (TST) entre 1985 e 2016 foi avaliada. O gado foi analisado de acordo com região, padrão alimentar, rebanho e idade. Um total de 890009 animais foram testados, com prevalência de 0,13% de tuberculose bovina (1172/890009). Diferença estatisticamente significativa foi encontrada em padrão alimentar e rebanhos. Prevalência em vacas (0,19%, 615/327022) foi mais alta que em bois (P< 0,01, OR= 1,903, 95% CI = 1,696 a 2,134). Diferenças significativas (P< 0,01; OR= 2,238, 95%; CI= 1,937 a 2,585) foram evidentes em taxas para tuberculose bovina em casas de camponeses (0,12%, 942/802343) e grupos de fazendeiros (0,26%, 230/87666). A prevalência de bTB caiu na prefeitura Aksu, a taxa positiva se encontrava abaixo de 0.1% a partir de 2010. Conclui-se que as medidas de controle para tuberculose bovina na região de Aksu foram eficazes.(AU)

Brucellosis and tuberculosis in cattle in South America / Brucelose e tuberculose bovinas na América do Sul

In general, European and North American countries, as well as Australia and New Zealand, have already eradicated or reached good levels of control of brucellosis and tuberculosis in cattle. In the rest of the world, however, the epidemiological situation of these two diseases is frequently poorly understood. In this review article, quantified data on these diseases in the South American countries are presented. Initially, the aspects that led the continent to host 25% of the world cattle population are presented, in addition to the aspects that placed the continent at a prominent position in the international meat market. Subsequently the continent was divided into three country groups, considering the size of the cattle population and how well the epidemiological situation of brucellosis and tuberculosis in cattle is quantified. It is argued that countries that do not generate high-quality quantitative epidemiological data on these diseases have serious limitations in outlining and managing control or eradication strategies. Thus, for successful outcomes, at least methodologies to estimate the prevalence of infected herds should be employed.(AU)

De maneira geral, os países da Europa e da América do Norte, além da Austrália e da Nova Zelândia, já erradicaram ou atingiram bons níveis de controle da brucelose e da tuberculose bovinas. Entretanto, no restante do mundo, raramente a situação epidemiológica dessas duas doenças é adequadamente conhecida. Neste artigo de revisão são apresentados dados de quantificação dessas importantes enfermidades nos países da América do Sul. Inicialmente são apresentadas as características que concorreram para que atualmente o continente tenha 25% do efetivo bovino mundial e uma posição de destaque no mercado internacional de carnes. Os países foram então alocados em três grupos, levando em consideração o tamanho da população bovina e a qualidade da quantificação referente à situação epidemiológica da brucelose e da tuberculose bovinas. Argumenta-se que países que não geram dados epidemiológicos quantitativos de alta qualidade em relação a essas doenças têm sérias limitações para traçar estratégias eficazes de combate e são incapazes de realizar a gestão dos processos. Conclui-se que os países que desejam ser exitosos no combate à brucelose e tuberculose bovinas deveriam ao menos utilizar metodologias para estimar a prevalência de focos.(AU)

False-negative reactions to the comparative intradermal tuberculin test for bovine tuberculosis / Reações falso-negativas ao teste cervical comparativo para tuberculose bovina

According to the Brazilian National Program for the Control and Eradication of Animal Brucellosis and Tuberculosis (PNCEBT), the routine tests for the diagnosis of bovine tuberculosis in the country are the simple intradermal tuberculin test (SITT) of the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply (MAPA), the caudal fold test and the comparative intradermal tuberculin test (CITT). The latter is also used as a confirmatory test. A group of 53 animals from three dairy herds in a focal area for bovine tuberculosis, that were submitted to depopulation in the state of Rio Grande do Sul, were submitted to the CITT. Tissues were cultured and the resulting colonies were confirmed by PCR and DNA sequencing. Among the 53 animals analyzed using the CITT, 32 (60.4%) were negative, 14 (26.4%) were positive and seven (13.2%) results were inconclusive. The CITT detected 11 of the 39 animals with culture-confirmed M. bovis infection as positive. Among the total of 14 uninfected animals based on cultures, the CBT detected eight as negative. Thus, the CITT demonstrated sensitivity of 28.2% and specificity of 57.1% for the population sampled. A total of 24/32 (75.0%) of the animals with negative CITT results were culture positive (confirmed by PCR) and were considered false negatives based on the CITT. The maintenance of these false-negative animals in herds has serious implications for the control of the disease, since they can be a source of infection. The addition of complementary tests could help identify such animals and increase the odds of diagnostic success.(AU)

No Brasil, segundo o Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose Animal (PNCEBT), do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA), os testes de rotina para o diagnóstico de tuberculose bovina são o teste cervical simples (TCC), o teste da prega caudal (TPC) e o teste cervical comparativo (TCC), sendo que o último também é utilizado como teste confirmatório. Um grupo de 53 animais oriundos de três rebanhos leiteiros de área de foco para tuberculose bovina que foram submetidos a vazio sanitário no Rio Grande do Sul foi submetido ao TCC. Os tecidos destes animais foram cultivados e as colônias resultantes confirmadas por PCR e sequenciamento de DNA. Dos 53 animais analisados no TCC, 32 (60,4%) foram negativos, 14 (26,4%) positivos e sete (13,2%) inconclusivos, com base no PNCEBT. O TCC detectou como positivos 11 dos 39 animais com infecção por M. bovis confirmada por cultivo. Do total de 14 animais não infectados, baseado na cultura, o TCC detectou oito como negativos. Assim, o TCC apresentou, para a população amostrada, sensibilidade de 28,2% e especificidade de 57,1%. Um total de 24/32 (75,0%) dos animais negativos ao TCC foi positivo no cultivo (confirmado por PCR), sendo considerados falso-negativos ao TCC. A manutenção destes animais falso-negativos nos rebanhos tem sérias implicações para o controle da enfermidade, já que os mesmos podem ser fonte de infecção. A adição de testes complementares poderia auxiliar na identificação destes animais, aumentando a cobertura diagnóstica.(AU)

Nasal swab real-time PCR is not suitable for in vivo diagnosis of bovine tuberculosis / A PCR em tempo real de swab nasal não é adequada para o diagnóstico in vivo de tuberculose bovina

Bovine tuberculosis (bTB) is a zoonosis causing economic losses and public health risks in many countries. The disease diagnosis in live animals is performed by intradermal tuberculin test, which is based on delayed hypersensitivity reactions. As tuberculosis has complex immune response, this test has limitations in sensitivity and specificity. This study sought to test an alternative approach for in vivo diagnosis of bovine tuberculosis, based on real-time polymerase chain reaction (PCR). DNA samples, extracted from nasal swabs of live cows, were used for SYBR® Green real-time PCR, which is able to differentiate between Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium avium complexes. Statistical analysis was performed to compare the results of tuberculin test, the in vivo gold standard bTB diagnosis method, with real-time PCR, thereby determining the specificity and sensitivity of molecular method. Cervical comparative test (CCT) was performed in 238 animals, of which 193 had suitable DNA from nasal swabs for molecular analysis, as indicated by amplification of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) gene, and were included in the study. In total, 25 (10.5%) of the animals were CCT reactive, of which none was positive in the molecular test. Of the 168 CCT negative animals, four were positive for M. tuberculosis complex at real time PCR from nasal swabs. The comparison of these results generated values of sensitivity and specificity of 0% and 97.6%, respectively; moreover, low coefficients of agreement and correlation (-0.029 and -0.049, respectively) between the results obtained with both tests were also observed. This study showed that real-time PCR from nasal swabs is not suitable for in vivo diagnosis of bovine tuberculosis; thus tuberculin skin test is still the best option for this purpose.(AU)

A tuberculose bovina (bTB) é uma zoonose que causa perdas econômicas e riscos à saúde pública em muitos países. O diagnóstico da doença em animais vivos é realizado pelo teste intradérmico da tuberculina, que é baseado em reações de hipersensibilidade tardia. Como a tuberculose tem resposta imunológica complexa, este teste tem limitações em termos de sensibilidade e especificidade. Este estudo procurou desenvolver uma abordagem alternativa para o diagnóstico in vivo da tuberculose bovina, com base na reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real. As amostras de DNA, extraídas de suabes nasais de vacas vivas, foram usadas para PCR em tempo real com SYBR® Green, capaz de diferenciar os complexos Mycobacterium tuberculosis e Mycobacterium avium. A análise estatística foi realizada para comparar os resultados de teste de tuberculina, padrão ouro para o diagnóstico in vivo da bTB, com PCR em tempo real, determinando-se assim a especificidade e sensibilidade do método molecular. O teste cervical comparativo (TCC) foi realizado em 238 animais, dos quais 193 tiveram DNA dos suabes nasais adequados para análise molecular, como indicado pela amplificação do gene gliceraldeído-3-fosfato-desidrogenase (GAPDH), e foram incluídos no estudo. No total, 25 (10,5%) animais foram reativos no TCC, dos quais nenhum foi positivo no teste molecular. Dos 168 animais negativos no TCC, quatro foram positivos para o complexo M. tuberculosis na PCR em tempo real a partir dos suabes nasais. A comparação destes resultados gerou valores de sensibilidade e especificidade de 0% e 97,6%, respectivamente; além disso, baixos coeficientes de concordância e correlação (-0,029 e -0,049, respectivamente) entre os resultados obtidos com ambos os testes também foram observados. Este estudo mostrou que a PCR em tempo real a partir de suabes nasais não é adequada para o diagnóstico in vivo da tuberculose bovina; portanto, o teste da tuberculina ainda é a melhor opção para este fim.(AU)

Ocorrência da brucelose e tuberculose bovina e percepção de riscos no Mato Grosso do Sul, Brasil / Occurrence of brucellosis and bovine tuberculosis and risk perception in Mato Grosso do Sul, Brazil

Determinar a ocorrência da brucelose, da tuberculose e a percepção de riscos acerca de ambas as zoonoses foi o objetivo do estudo em rebanhos bovinos leiteiros do município de Paranaíba, Mato Grosso do Sul, Brasil. As visitas ocorreram entre novembro de 2012 e março de 2013, em 42 propriedades georreferenciadas, nas quais foram aplicados questionários aos produtores e realizadas as coletas de sangue para testes sorológicos e de tuberculinização. A ocorrência de focos, tanto da brucelose quanto da tuberculose, nas propriedades foi de 2,38% (1/42), porém, há um baixo conhecimento dos produtores sobre os fatores de risco para essas doenças.(AU)

The aim of these study was to determine the occurrences of brucellosis and bovine tuberculosis, and the perception of dairy farmers on the risk of these diseases in dairy cattle herds in the municipality of Paranaíba, Mato Grosso do Sul state, Brazil. The total of 42 properties were visited for the application of a questionnaire to dairy farmers, and blood sample collection for serological and tuberculin test, from November 2012 to March 2013. The occurrence of outbreaks, both of brucellosis and tuberculosis, in the properties was 2.38% (1/42). The data showed deficiency in risk perception of these diseases on the part of the farmers.(AU)

Comparison of nine DNA extraction methods for the diagnosis of bovine tuberculosis by real time PCR / Comparação de nove métodos de extração de DNA para diagnóstico de tuberculose bovina por PCR em tempo real

ABSTRACT: Bovine tuberculosis is an infectious disease with a high impact on the cattle industry, particularly in developing countries. PCR is a very sensitive method for detection of infectious agents, but the sensitivity of molecular diagnosis is largely dependent on the efficiency of the DNA extraction methods. The objective of this study was to evaluate DNA extraction methods for direct detection of Mycobacterium bovis in bovine tissue. Nine commercial kits for DNA extraction were evaluated when combined with two real time PCRs. The DNeasy Blood & Tissue Kit from QIAGEN showed better performance and sensitivity followed by the DNA Mini Kit RBC and FTA Elute Micro Card. Results suggested that, even when the analytical sensitivity of the qPCR is very high, the extraction method can influence the diagnostic sensitivity.

RESUMO: A tuberculose bovina é uma doença infecciosa com um alto impacto na pecuária, particularmente em países em desenvolvimento. A PCR é um método muito sensível para a detecção de agentes infecciosos, mas a sensibilidade do diagnóstico molecular é em grande parte dependente da eficiência dos métodos de extração de DNA. O objetivo deste estudo foi avaliar métodos de extração de DNA para detecção direta de Mycobacterium bovisem tecido bovino. Nove kits comerciais para extração de DNA foram avaliados, quando combinados com duas PCRs em tempo real. O Kit Dneasy Blood & Tissue da Qiagen apresentou melhor desempenho e sensibilidade, seguido dos kits DNA Mini RBC e FTA Elute Micro Card (protocolo modificado com digestão enzimática prévia). Os resultados sugerem que, mesmo quando a sensibilidade analítica do qPCR é muito elevada, o método de extração pode influenciar na sensibilidade de diagnóstico.

Diagnosis of bovine tuberculosis: review of main techniques / Diagnóstico de tuberculose bovina: revisão das principais técnicas

Abstract Bovine tuberculosis (BTB) remains an important economic and zoonotic problem in Latin America. Traditionally, the fight against BTB is initiated by the implementation of routine diagnostic tests for certification of free properties. The diagnosis of BTB can be made by direct and indirect methods, in which we can mention clinical, post mortem, histopathological, immunological, bacteriological and molecular methods. The renewal of scientific interest in tuberculosis in recent year has led to develop and improve methods of diagnosis, prevention, control and eradication of BTB. The aim of this review is to present and discuss different diagnosis methods of BTB.

Resumo A tuberculose bovina (BTB) continua sendo um importante problema econômico na América Latina, com potenciais consequências zoonóticas. Tradicionalmente, a luta contra a tuberculose bovina tem sido iniciada pela execução de testes de diagnóstico de rotina para a certificação de propriedades livres da doença. O diagnóstico de BTB pode ser feito através de métodos diretos e indiretos, nos quais podemos citar os métodos clínicos, post mortem, histopatológicos, imunológicos, bacteriológicos e moleculares. A renovação do interesse científico em tuberculose nos últimos anos tem levado à necessidade de desenvolver e melhorar os métodos de diagnóstico, prevenção, controle e erradicação da BTB. O objetivo deste artigo é analisar e discutir sobre os diferentes métodos de diagnóstico de BTB.

Identificação e genotipagem de mycobacterium bovis em bovinos positivos no teste intradérmico para tuberculose em Mato Grosso do Sul / Identification and genotyping of mycobacterium bovis from positive cattle in skin test for tuberculosis in the state of Mato Grosso do Sul, Brazil

Neste estudo, realizou-se genotipagem de isolados de Mycobacterium bovis, provenientes de amostras de tecidos de bovinos positivos no teste cervical comparativo (TCC) para tuberculose em Mato Grosso do Sul, por meio da técnica de spoligotyping. Tecidos de 13 bovinos positivos, oriundos de diferentes municípios do estado, foram cultivados em meio de Stonebrink. As colônias resultantes foram submetidas à coloração de Ziehl-Neelsen e todos os isolados apresentaram características tintoriais de BAAR. Os 13 isolados de BAAR foram identificados por PCR multiplex (mPCR). O gene hsp65 foi alvo para identificação de Mycobacterium spp, a sequência de inserção IS6110 foi alvo para identificação de complexo Mycobacterium tuberculosis (CMT) e a região rvd1rv2031c foi explorada para detecção de M. bovis. Os isolados micobacterianos foram genotipados pela técnica de spoligotyping. Dos 13 bovinos, sete tinham pelo menos uma lesão sugestiva de tuberculose em linfonodos retrofaríngeos, parotídeos e pulmonares ou no pulmão, e em seis não foram encontradas lesões visíveis sugestivas da doença. Na mPCR, 11/13 (84,6%) isolados foram positivos para Mycobacterium spp, 8/13 (61,5%) positivos para CMT e 7/13 (53,8%) positivos para M. bovis. Com base no spoligotyping, oito isolados de BAAR foram agrupados dentro de três diferentes agrupamentos de genótipos e uma amostra remanescente apresentou perfil único, sendo quatro isolados com padrão de espoligotipo SB0121, dois SB1145, dois SB0881 e um SB0140. A técnica de spoligotyping demonstrou que há diversidade genética entre os espoligotipos presentes no estado de Mato Grosso do Sul, embora predomine o perfil SB0121.

Spoligotyping was performed in the present study to genotype Mycobacterium bovis isolates obtained from tissues of cattle that were positive in the comparative intradermal tuberculin test (CITT) in the state of Mato Grosso do Sul (Brazil). Tissue samples from 13 positive cattle from different municipalities of the state were cultured using a Stonebrink medium. The resulting colonies were subjected to Ziehl-Neelsen staining and all isolates exhibited the staining characteristics of AFB. The 13 isolates of AFB were identified by means of a multiplex PCR (mPCR) assay. The hsp65 gene was targeted for the identification of Mycobacterium spp., whereas the IS6110 insertion sequence was targeted for the identification of the Mycobacterium tuberculosis complex (MTC) and the rvd1rv2031c region was explored for the detection of Mycobacterium bovis. The spoligotyping assay was performed to genotype mycobacterial isolates. Of the 13 cattle, seven had at least one lesion suggestive of tuberculosis in the retropharyngeal, parotid and lung lymph nodes or lung. The remaining six exhibited no lesions suggestive of the disease. In the mPCR, 11 of the 13 isolates (84.6%) were positive for Mycobacterium spp., 8/13 (61.5%) were positive for the MTC and 7/13 (53.8%) were positive for M. bovis. Based on the spoligotyping, eight isolates were grouped into three different groups of genotypes and one isolate exhibited an orphan type. Four isolates exhibited spoligotype pattern SB0121, while two isolates were associated with the pattern SB1145, another two were associated with pattern SB0881 and one was associated with pattern SB0140. Spoligotyping confirmed the genetic diversity present among isolates found in the state of Mato Grosso do Sul. In addition, SB0121 was confirmed as the predominant profile.

Teste intradérmico com proteínas recombinantes de Mycobacterium bovis como antígenos em Cavia porcellus / Skin test with recombinant protein of Mycobacterium bovis as antigen in Cavia porcellus

O teste intradérmico para o diagnóstico da tuberculose bovina utiliza derivados proteicos purificados (PPD) de Mycobacterium bovis que são capazes de induzir reações de hipersensibilidade em animais infectados. No entanto, apresenta baixa especificidade devido à ocorrência de reações cruzadas com outras micobactérias. Neste sentido, o objetivo desse trabalho foi produzir proteínas recombinantes (ESAT-6, PE13, PE5 e ESX-1) de Mycobacterium bovis e avaliá-las como antígenos em teste intradérmico utilizando Cavia porcellus como modelo, e verificar se as condições empregadas na purificação (nativa ou desnaturante) interferem no desempenho antigênico dessas proteínas. As proteínas foram testadas em Cavia porcellus previamente sensibilizados com cepa M. bovis AN5 inativada, individualmente (160 µg) ou combinadas na forma de um coquetel (40 µg cada). O coquetel de proteínas induziu reações de hipersensibilidade nos animais sensibilizados significativamente superiores (p=0,002) as observadas nos animais não sensibilizados, possibilitando diferenciação. No entanto, as proteínas isoladamente não foram capazes de promover essa diferenciação. As condições de solubilização e purificação influenciaram o desempenho antigênico da proteína ESAT-6, pois, quando produzida em condição desnaturante desencadeou reações inespecíficas nos animais não sensibilizados, enquanto que aquela produzida em condições nativas e aplicada em concentrações de 6, 12, 24 e 48µg induziu reações significativas apenas nos animais sensibilizados, confirmando o seu potencial como antígeno.

The intradermal skin test for diagnosis of bovine tuberculosis has been used the purified protein derivative (PPD) of Mycobacterium bovis, that is able to induce a hypersensitivity reaction in infected animals. However, shows low specificity due to the occurrence of cross reactions with other mycobacteria. Thus, the aim of this study was to produce recombinant proteins (ESAT-6, PE13, PE5 and ESX-1) of Mycobacterium bovis and assess them as antigens in skin test using guinea pigs (Cavia porcellus) as a model, and check if the conditions employed in the purification (native or denaturing condition) interfere in the antigenic performance of these proteins. The proteins were tested in guinea pigs previously sensitized with inactivated M. bovis strain AN5, individually (160 µg/µl), or as a mixed cocktail (40 µg each). The cocktail of proteins induced hypersensitivity reactions in sensitized animals significantly (p=0.002) higher than those observed in non-sensitized animals, allowing differentiation. On the other hand, the proteins individually were not able to promote this differentiation. The conditions of solubilization and purification influenced the antigenic performance of the protein ESAT-6, since, when produced in denaturing condition triggered nonspecific reaction in non-sensitized animals. Whereas when produced under native conditions and used at concentrations (6, 12, 24 and 48µg/µl) induced a significant response only in sensitized animals, confirming its potential as antigen.

Use of PCR for detection of bovine tuberculosis bacillus in milk of positive skin test cows / Uso da PCR para detecção de bacilo da tuberculose bovina em leite de vacas positivas ao teste cutâneo

The causative agent of bovine tuberculosis (BTB) is Mycobacterium bovis, a bacterium belonging to the M. tuberculosiscomplex (MTC). The definitive diagnosis is achieved through isolation and identification of M. bovis from clinical samples, using a combination of traditional culture and biochemical methods, which is considered the “gold standard”. This procedure is cumbersome and time-consuming. We evaluated a PCR assay for the direct detection of MTC DNA in milk of positive skin test cows, using primers that were previously tested and proven reliable to target the IS6110element. Milk previously seeded with M. bovis was used as the starting material, for standardization of the technique. The procedure involved extracting the DNA by enzymatic lysis (proteinase K and lysozyme), phenol, chloroform, isoamyl alcohol, followed by ethanol precipitation and PCR. The PCR assay allowed us to detect BTB in artificially contaminated milk, with a detection limit of 100 CFU/mL, and was also able to detect the bacillus in 50% (75/150) of the milk samples tested. This procedure could be used to assist the in vivo diagnosis of BTB, complementing sorological or microbiological tests, becoming an alternative option for epidemiological studies of BTB transmission and preventing contaminated milk from entering the food supply.

O agente causador da tuberculose bovina (BTB) é o Mycobacterium bovis, uma bactéria pertencente ao complexo M. tuberculosis (CMT). O diagnóstico definitivo é realizado através do isolamento e identificação de M. bovis em amostras clínicas, utilizando uma combinação de cultura bacteriológica e métodos bioquímicos, que são considerados como “padrão de ouro”. Entretanto, esses procedimentos são trabalhosos e demorados. No presente estudo, foi avaliado um ensaio de PCR para a detecção direta de DNA de CMT em leite de vacas positivas ao teste cutâneo, utilizando primerspreviamente testados e comprovadamente confiáveis, para amplificação da região de interesse IS6110. Leite previamen- te contaminado com M. bovis foi utilizado como material de partida para a padronização da técnica. O procedimento envolveu a extração do DNA por lise enzimática (proteinase K e lisozima), fenol, clorofórmio, álcool isoamílico, segui- do de precipitação com etanol e PCR. O ensaio de PCR detectou BTB em leite artificialmente contaminado, com um limite de detecção de 100 UFC/mL, e também foi capaz de detectar o bacilo em 50% (75/150) das amostras de leite testadas. A técnica de PCR pode ser utilizada para auxiliar o diagnóstico in vivo da BTB, além de complementar os tes- tes sorológicos ou microbiológicos, tornando-se uma alternativa para estudos epidemiológicos da transmissão de BTB, prevenindo que o leite contaminado entre na cadeia de alimentos.

Cellular immune response of Curraleiro Pé-duro and Nellore calves following Mycobacterium bovis-BCG vaccination / Resposta imune celular de bezerros Curraleiro Pé-duro e Nelore após vacinação com Mycobacterium bovis-BCG

The present study aimed to assess the CD4, CD8 and Gamma delta T cells blood levels for Curraleiro Pé-duro, as well as the specific IFN-γ response after BCG vaccination using flow cytometry. The specific immune response against BCG was also evaluated by tuberculin skin test, performed before and 45 days after the vaccination. For comparison purposes, the same parameters were investigated on Nellore calves, an exotic bovine with resistance previously demonstrated. Naturally, Curraleiro Pé-duro animals had greater levels of CD4, CD8 and Gamma delta lymphocytes (p<0.05). In response to vaccine, Curraleiro Pé-duro showed greater ability to respond specifically to BCG, generating resistance profile (Th1), evidenced by greater number of antigen specific CD4+ cells producing IFN-γ (p<0.05) and also higher tuberculin skin test reaction (p<0.05). Additionally, vaccinated Curraleiro Pé-duro calves had higher CD4 cells numbers than both Nellore control (p<0.05) and vaccinated groups (p<0.05). Curraleiro Pé-duro calves' higher basal lymphocytes blood level and stronger response in both IFN-γ and tuberculin skin test parameters probably play a positive role on protection/resistance to Mycobacterium bovis.

O presente estudo teve como objetivo avaliar níveis sanguíneos de células CD4, CD8 e células T gama-delta no sangue periférico de bezerros Curraleiro Pé-Duro, bem como a produção específica de IFN-γ por essas células em resposta à vacinação com BCG, através de citometria de fluxo. A resposta imune específica contra BCG também foi avaliada por teste tuberculínico, realizado antes e 45 dias após a vacinação. Para fins de comparação, os mesmos parâmetros foram investigados em bezerros da raça Nelore, uma raça bovina exótica com resistência demonstrado anteriormente. Naturalmente, animais da raça Curraleiro Pé-Duro apresentaram maiores níveis de CD4, CD8 e linfócitos gama-delta. Em resposta a vacina, Curraleiro Pé-duro mostrou maior capacidade de responder especificamente ao BCG, gerando perfil de resistência (Th1), evidenciado pelo maior número de células CD4+ específicas produtoras de IFN-γ e maior reação cutânea a por tuberculina. Os maiores níveis basais de linfócitos, maior produção de IFN-γ e reação cutânea à prova tuberculínica provavelmente desempenham um papel positivo na proteção/resistência ao Mycobacterium tuberculosis.

Análise de detecção de cluster na caracterização espaço-temporal da tuberculose bovina no estado da Bahia / Cluster detection analyses for temporal-spatial characterization of bovine tuberculosis in Bahia, Brazil

A tuberculose bovina (BTB) é uma enfermidade causada pela infecção pelo Mycobacterium bovis que acomete o homem e diversas espécies de mamíferos. A BTB tem grande importância por causar prejuízos econômicos nas regiões infectadas e por seu impacto na saúde pública. Foi realizado inquérito epidemiológico no Estado da Bahia, entre 2008 e 2010, com o objetivo de estimar a prevalência e conhecer a distribuição espaço temporal da enfermidade. O Estado foi estratificado em quatro regiões, cada uma com características epidemiológicas e demográficas homogêneas representativas de formas de produção pecuária. Um total de 18.810 cabeças com idade superior a 2 anos foi amostrado em 1350 propriedades. O teste cervical comparativo foi aplicado em cada animal selecionado, sendo considerados positivos os animais reagentes positivos ou duas vezes inconclusivos. Latitude e Longitude foram tomadas para cada propriedade amostrada com o auxilio do aparelho de Global Positioning System (GPS). O teste de Cuzick-and-Edwards e a análise de rastreio espacial (spatial scan statistic) foram utilizados para identificar qualquer agrupamento espacial de BTB. A prevalência de rebanho na Bahia, indicando a proporção de propriedades foco, foi de 1,6% (IC 95%: 1,0% - 2,69% por região). Nenhuma evidência significativa (P<0.05) de aglomeração espacial ou clustering foi detectada, possivelmente devido à baixa prevalência da doença. Estes resultados sugerem que a BTB tem baixa prevalência no estado da Bahia e que, nestas condições epidemiológicas, os focos encontrados não podem ser explicados por fatores espacialmente estruturados.

Bovine tuberculosis (BTB) is a disease caused by the infection with Mycobacterium bovis that affects humans and several mammalian species. BTB is important, because it inflicts far-reaching economic losses to infected regions, and due to its impact on public health. Epidemiological surveys were conducted in the State of Bahia between 2008 and 2010 with the objective to estimate the prevalence and to assess the spatial distribution of the disease. The State of Bahia has been stratified into four regions, each of them representing a set of homogeneous epidemiological and demographic characteristics, referred to as Production Circuits. A total of 18,810 more than 2-year-old cattle in 1,305 herds, ranging from 320 to 370 ones per region, and 20 to 40 cattle per herd were randomly selected. A cervical comparative test was applied to each selected animal; reactive cattle and cattle with two consecutive inconclusive tests were considered BTB-positive, whereas non-reactive cattle were considered BTB-negative. Positive herds were classified as those with <20 sampled cattle and at least one BTB-positive, as well as those with 40 cattle sampled with <2 BTB-positive animals. Latitude and longitude were recorded for each sampled herd with a generic Global Positioning System (GPS). The Cuzick-and-Edwards' test and the spatial scan statistic were used to assess whether BTB was spatially clustered. Herd-level prevalence, as indicated by the proportion of case-herds, was 1.6% (range 0.3 to 2.9% per region). No significant evidence (P<0.05) of spatial clustering was detected, most likely due to the low disease prevalence in the region. Results here suggest that BTB is low prevalent in the State of Bahia and that under these conditions epidemiological outbreaks found cannot be explained by spatially-structured factors.